原理 多重免疫组化（mIHC）是一项先进技术，能在单张组织切片上同时检测多个靶标。该技术主要依托酪胺信号放大技术（Tyramide signal amplification, TSA）。简单来讲，TSA技术属于一类借助辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测手段。
TSA荧光染料由酪胺分子(tyramine，T)与荧光染料偶联构成。在过氧化氢(H₂O₂)环境里，非活性的酪胺分子(T)被与二抗偶联的HRP催化激活，大量发生酶促反应，转变为具有短暂活性的中间态分子(T*)，并形成共价键结合位点，与邻近蛋白（涵盖靶抗原蛋白、一抗、二抗及HRP）的富电子区域（如色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）通过共价键偶联而沉积。
如此一来，偶联在酪胺分子上的荧光染料也在共价偶联蛋白周围大量沉积，信号由此得到有效放大。由于抗原—酪胺蛋白间共价键的键能稳定性远超抗原—抗体间的非共价键结合力，之后借助微波修复，洗去结合在抗原上的一抗—HRP二抗—TSA染料复合物，仅保留与抗原偶联的TSA荧光染料信号。接着更换针对不同靶蛋白的抗体、不同激发波长和发射波长的TSA染料，进行第二轮孵育，依此循环，经多轮复染便可实现组织的原位多靶点染色（最多可达八标九色）。