活死细胞双染色试剂盒
活死细胞双染色试剂盒是一种常用于细胞生物学研究中区分活细胞和死细胞的工具，以下从原理、组成、操作步骤、应用等方面进行介绍：
常见检测原理
· 基于细胞膜完整性
· Calcein-AM/PI 双染色：Calcein-AM 是一种可透过完整细胞膜的荧光染料，进入细胞后被细胞内的酯酶水解生成 Calcein，它能与细胞内的钙离子结合发出绿色荧光，从而标记活细胞。碘化丙啶（PI）不能透过完整的细胞膜，只能进入细胞膜破损的死细胞，与细胞内的核酸结合发出红色荧光，以此区分活细胞和死细胞。
· FDA/PI 双染色：荧光素二乙酸酯（FDA）可被活细胞内的酯酶分解产生荧光素，在荧光显微镜下呈现绿色荧光。PI 则用于标记死细胞，方法与上述 Calcein-AM/PI 双染色中的 PI 标记原理相同。
· 基于线粒体膜电位
· JC-1 染色：JC-1 是一种对线粒体膜电位敏感的荧光染料。在正常的活细胞中，线粒体膜电位较高，JC-1 聚集在线粒体基质中形成聚合物，发射红色荧光。而在凋亡或死亡的细胞中，线粒体膜电位降低，JC-1 以单体形式存在于胞质中，发射绿色荧光。通过观察细胞发出的荧光颜色，可区分活细胞和死细胞。
试剂盒组成
· 染料试剂：如上述提到的 Calcein-AM、PI、FDA、JC-1 等荧光染料，以及相应的溶解试剂、缓冲液等，确保染料能够稳定保存和发挥作用。
· 阳性对照试剂：一般会提供已知的活细胞和死细胞样本或特定的试剂，用于验证试剂盒的有效性和染色效果，以确保实验操作的准确性。
· 阴性对照试剂：通常为不含细胞的缓冲液等，用于排除非特异性染色和背景干扰。
· 其他辅助试剂：可能包括细胞清洗液、固定液等，用于细胞染色前的预处理和染色后的固定，以保证细胞形态和染色效果的稳定性。
操作步骤
1. 细胞准备：将待检测的细胞培养至合适的状态，制成细胞悬液，调整细胞浓度至适当范围。
2. 染色：按照试剂盒说明书的要求，向细胞悬液中加入适量的双染色工作液，如将 Calcein-AM 和 PI 按照一定比例混合后加入细胞悬液，轻轻混匀，在适宜的温度下孵育一定时间，一般为 15-30 分钟。
3. 清洗：孵育结束后，用相应的清洗液洗涤细胞，去除未结合的染料，以减少背景荧光干扰。
4. 检测：将染色后的细胞悬液滴加到载玻片上，用荧光显微镜或流式细胞仪等设备进行观察和分析。在荧光显微镜下，根据不同荧光颜色区分活细胞和死细胞，并可进行细胞计数等操作；流式细胞仪则可对大量细胞进行快速、准确的分析，得到活细胞和死细胞的比例等数据。
应用领域
· 细胞培养监测：在细胞培养过程中，实时监测细胞的活力和死活状态，及时了解细胞的生长状况，判断培养条件是否合适，以便采取相应的措施优化培养条件，提高细胞培养的质量和效率。
· 药物毒性研究：评估药物对细胞的毒性作用，通过观察药物处理后活死细胞的比例变化，确定药物的半数致死浓度（LC50）等参数，为药物的毒理学评价提供重要依据。
· 细胞凋亡研究：区分正常细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞，研究细胞凋亡的机制和过程，分析不同因素对细胞凋亡的诱导作用，为肿瘤治疗、神经退行性疾病等领域的研究提供技术支持。
· 干细胞研究：在干细胞的培养、分化和移植等研究中，监测干细胞的活力和存活情况，评估干细胞的质量和功能，为干细胞治疗的临床应用提供保障。
技术支持
亚科因（武汉）生物技术有限公司
Abbkine亚科因致力于细胞科研检测及细胞治疗领域关键生化检测试剂盒的研发、生产和销售,成为全球细胞制药领域创新的关键推动者。
活死细胞双染色试剂盒是一种常用于细胞生物学研究中区分活细胞和死细胞的工具，以下从原理、组成、操作步骤、应用等方面进行介绍：
常见检测原理
· 基于细胞膜完整性
· Calcein-AM/PI 双染色：Calcein-AM 是一种可透过完整细胞膜的荧光染料，进入细胞后被细胞内的酯酶水解生成 Calcein，它能与细胞内的钙离子结合发出绿色荧光，从而标记活细胞。碘化丙啶（PI）不能透过完整的细胞膜，只能进入细胞膜破损的死细胞，与细胞内的核酸结合发出红色荧光，以此区分活细胞和死细胞。
· FDA/PI 双染色：荧光素二乙酸酯（FDA）可被活细胞内的酯酶分解产生荧光素，在荧光显微镜下呈现绿色荧光。PI 则用于标记死细胞，方法与上述 Calcein-AM/PI 双染色中的 PI 标记原理相同。
· 基于线粒体膜电位
· JC-1 染色：JC-1 是一种对线粒体膜电位敏感的荧光染料。在正常的活细胞中，线粒体膜电位较高，JC-1 聚集在线粒体基质中形成聚合物，发射红色荧光。而在凋亡或死亡的细胞中，线粒体膜电位降低，JC-1 以单体形式存在于胞质中，发射绿色荧光。通过观察细胞发出的荧光颜色，可区分活细胞和死细胞。
试剂盒组成
· 染料试剂：如上述提到的 Calcein-AM、PI、FDA、JC-1 等荧光染料，以及相应的溶解试剂、缓冲液等，确保染料能够稳定保存和发挥作用。
· 阳性对照试剂：一般会提供已知的活细胞和死细胞样本或特定的试剂，用于验证试剂盒的有效性和染色效果，以确保实验操作的准确性。
· 阴性对照试剂：通常为不含细胞的缓冲液等，用于排除非特异性染色和背景干扰。
· 其他辅助试剂：可能包括细胞清洗液、固定液等，用于细胞染色前的预处理和染色后的固定，以保证细胞形态和染色效果的稳定性。
操作步骤
1. 细胞准备：将待检测的细胞培养至合适的状态，制成细胞悬液，调整细胞浓度至适当范围。
2. 染色：按照试剂盒说明书的要求，向细胞悬液中加入适量的双染色工作液，如将 Calcein-AM 和 PI 按照一定比例混合后加入细胞悬液，轻轻混匀，在适宜的温度下孵育一定时间，一般为 15-30 分钟。
3. 清洗：孵育结束后，用相应的清洗液洗涤细胞，去除未结合的染料，以减少背景荧光干扰。
4. 检测：将染色后的细胞悬液滴加到载玻片上，用荧光显微镜或流式细胞仪等设备进行观察和分析。在荧光显微镜下，根据不同荧光颜色区分活细胞和死细胞，并可进行细胞计数等操作；流式细胞仪则可对大量细胞进行快速、准确的分析，得到活细胞和死细胞的比例等数据。
应用领域
· 细胞培养监测：在细胞培养过程中，实时监测细胞的活力和死活状态，及时了解细胞的生长状况，判断培养条件是否合适，以便采取相应的措施优化培养条件，提高细胞培养的质量和效率。
· 药物毒性研究：评估药物对细胞的毒性作用，通过观察药物处理后活死细胞的比例变化，确定药物的半数致死浓度（LC50）等参数，为药物的毒理学评价提供重要依据。
· 细胞凋亡研究：区分正常细胞、早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞或坏死细胞，研究细胞凋亡的机制和过程，分析不同因素对细胞凋亡的诱导作用，为肿瘤治疗、神经退行性疾病等领域的研究提供技术支持。
· 干细胞研究：在干细胞的培养、分化和移植等研究中，监测干细胞的活力和存活情况，评估干细胞的质量和功能，为干细胞治疗的临床应用提供保障。
技术支持
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