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浅析免疫组织化学中常用的染料苏木素

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对于从事免疫组化工作的工作者来说,提起苏木素想必并不陌生,这种从洋苏木中提取的一种染色剂,其本身并没有染色作用,在被氧化后生产苏木精,同媒染剂如铁矾或者铝明矾一起使用,能够使细胞染色。苏木素是组织化学和免疫组织化学中常用的染色料之一,免疫组织化学染色方法有很多种,包括荧光素标记、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、免疫金银及铁标记技术等,一些机构提供免疫组化染色服务。
苏木素染液于1863年被提倡用于对细胞核进行染色,目前是病理常规HE制片中最基本的染色方法,已经广泛用于病理技术。在HE 染色中,细胞核的着色情况直接影响着病理切片的质量。而苏木素染液又是细胞核染色的关键,苏木素染色的好坏决定着细胞核的着色深浅,也决定了一张切片的质量。苏木素染液的种类也多种,Harris 明矾苏木素液是病理技术室最常用、最重要的苏木精-伊红(HE)染液之一,也为一般实验室所采用,几乎所有的常规切片、冷冻切片、涂片以及免疫组织化学后的复染均使用这种染液。免疫组化是一门将免疫学与分子生物学技术同病理形态学方法相结合所形成的一门学科。
免疫组织化学利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性的原理,先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中同类的抗原物质。美迪西是一家临床前CRO公司,提供免疫组化染色服务。
由于抗原和抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中未知抗原进行定性,定位或定量的研究。那么常见的苏木素染液有哪些呢?
1、Harris苏木素
Harris苏木素是病理技术中最经典、最常用的染液,用于常规石蜡切片、冷冻切片、细胞学涂片等的HE染色制片,原料包括苏木精、硫酸铝钾、无水乙醇和蒸馏水。Harris 苏木素液呈深紫红色,有沉淀及氧化膜形成,染色后核着色清晰呈深蓝色。H a r r i s 苏木素的配方中氧化剂是氧化汞,在使用过程中通过加温氧化,可以加速苏木红的形成。不过Harris苏木素在配制过程中过氧化程度不易控制.容易因过氧化而产生大量沉淀,而且使用过程中组织切片易被过氧化形成的颗粒沉淀和表层金属氧化薄膜所污染。这两个因素是影响染液染色效果和使用寿命的关键。而且氧化汞有剧毒污染环境。
Harris苏木素用在免疫组化染色中,使用期短,染片量多时约一周就得更换一次,氧化结晶,多每次使用必须过滤。
2、Gill 改良苏木素
原料包括苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、蒸馏水、冰醋酸和无水乙醇。,Gill 苏木素的配方虽然减少了硫酸铝钾的用量,用碘酸钠代替氧化汞,使其不完全氧化,但色素基仍参与铝离子的结合而完成组织的显色,但是因为苏木素的用量减少了,在染色过程中细胞核的着色不够鲜亮,试剂使用时间短,着色能力不够平衡。
3、Mayer 苏木素液
原料包括苏木素、钾明矾、醋酸钠、蒸馏水、水合氯醛和柠檬酸,Mayer 苏木素液染色时间长,所染切片细胞核胞质染色分明,红蓝适度,溶液呈蓝紫色,通常用于对比染色。
4、Lillie-Mayerh 苏木素
原料苏木精、硫酸铝钾、碘酸钠、蒸馏水、冰醋酸和甘油,Lillie-Mayerh 苏木素的配方中,用碘酸钠代替氧化汞,减少硫酸铝钾的用量,而且染色液中加入了甘油,这样使得剩余氧化的苏木素在使用过程中仍能自然氧化,能缓慢不断的补充发色基和助色基以达到相对稳定的染色环境。Lillie-Mayerh 苏木素染液呈深紫红色,无沉淀及氧化膜形成,核染蓝色,淋巴细胞显色轮廓清楚,核仁、核膜及核内染色质颗粒清晰,并见核分裂像,其余各种成份分辨良好,胞质分化后基本无色,经伊红复染后,两者对比度适中,色彩靓丽。
而且碘酸钠用量适当在苏木素染液中分布均匀,分子间的氧化交换呈均匀反应,无氧化膜形成,由此减少了对切片的污染,染色能力得到了提高。
对比以上几种苏木素染色法发现,在苏木素染色液中,苏木精是基本的染料,多使用酒精、乙二醇等醇溶液试剂溶解,常用的金属媒染剂包括硫酸铝钾、硫酸铝铵、硫酸铝等,为了达到快速使用的目的,常常需要在苏木素染液中加入氧化汞、碘酸钠等氧化剂等。作为组织化学和免疫组织化学中最常用的染料之一,苏木素可以广泛用于组织切片或培养细胞的染色。苏木素染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色等配合使用,可以在苏木素染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色,也可以在免疫组化染色后再进行苏木素复染。


1楼2019-12-12 09:56回复