-
0一、原理 多重免疫组化(mIHC)是一项先进技术,能在单张组织切片上同时检测多个靶标。该技术主要依托酪胺信号放大技术(Tyramide signal amplification, TSA)。简单来讲,TSA技术属于一类借助辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测手段。 TSA荧光染料由酪胺分子(tyramine,T)与荧光染料偶联构成。在过氧化氢(H₂O₂)环境里,非活性的酪胺分子(T)被与二抗偶联的HRP催化激活,大量发生酶促反应,转变为具有短暂活性的中间态分子(T*)
-
1
-
0000000000今年第二次考病理士,去年只考过了一科,想问一下要做什么练习题好,(去年我做的是云考职宝太垃圾了,偏题严重)!0样本收集 在众多动物实验流程中,样本收集是一个不可或缺的环节,其执行过程并无铁定的法则,仅有一些通用准则。依据实验需求进行操作是样本收集的基本前提,在此基础之上,各类样本需遵循的通用准则如下: 1. 采集无污染样本时 ① 手术工具需进行常规消毒处理。 ② 在采集非表面样本时,需注意剥除皮肤,以防皮肤对样本造成污染。无需模仿临床样本采集流程,无需进行皮肤准备和表面消毒。 ③ 在确定样本采集顺序时,需优先考虑胃肠样0一、载玻片的预处理 1,爬片可采用常规盖玻片或特定爬片。 2.把裁剪适宜的爬片,放入浓硫酸中浸泡一整夜,次日先以自来水清洗20次,再以三次蒸馏水清洗3次,置于餐盒或培养皿中干燥后,进行高压灭菌处理,再次干燥。 4.以多聚赖氨酸对玻片进行处理,增强细胞与玻片的附着性。 二、细胞爬片的制备过程 1.利用胰酶对细胞进行消化后,进行计数,并将细胞重新悬浮于全培养基中。 2.在添加细胞时,依据玻片尺寸,预先在各孔预定放置爬片的位置0000000番红固绿染色是一种常用的植物组织染色技术,通过利用染料分子对细胞内不同成分的亲和性差异,实现对特定结构的选择性着色,从而增强细胞结构的可视化效果。以下是关于番红固绿染色实验操作的一些小细节和注意事项。 一、实验原理 番红固绿染色主要基于染料分子与细胞内特定成分的相互作用。番红能够与植物细胞壁中的木质素、纤维素等多糖发生作用,形成鲜明的颜色对比;而固绿则常用于染色含有浆质的纤维素细胞组织,使细胞结构更0省自然科学基金与国家自然科学基金是否进行查重比对的问题,涉及到学术界对于科研项目管理的严谨性以及对于学术诚信的重视。虽然两者不会直接互通查重系统,但它们在确保科研项目申请材料原创性和独特性方面有着严格的规定和措施。 一、独立的查重机制 首先,省自然科学基金和国家自然科学基金拥有各自独立的查重机制。这意呸着,两个基金组织都设有自己的查重系统,用以检查提交的标书内容是否与已有项目或之前提交的内容有高度相0一、实验原理 小鼠骨髓细胞中的有丝分裂活动旺盛,因此能够直接获取中期细胞,无需像血淋巴细胞那样需经过体外培育。骨髓细胞具备高度的分裂能力,经过秋水仙碱(秋水仙素)处理后,能将分裂的细胞阻滞在有丝分裂的中期阶段。随后,通过低渗处置、固着、滴涂、着色等一系列步骤,可以制作出优质的骨髓细胞染色体样本。 利用骨髓获取染色体相对简便,通常无需在无菌条件下操作。此方法在临床医学中多用于白血病的研究,在实验环境下0一、引物二聚出现五大原因 1.CR循环次数过多:过多的循环次数会显著增加引物二聚体形成的机会。建议在优化PCR反应条件时合理设置循环次数,以减少非特异性产物。 2.退火温度过低:退火温度过低可能导致引物之间或引物自身3'端的部分碱基互补结合,从而形成二聚体。确保退火温度略高于引物的最低结合温度,可以有效减少二聚体的形成几率。 3.模板量过低:在模板量不足的情况下,空余的引物更易相互结合形成二聚体。确保充足的模板量是0Western Blot技术,作为检测特定蛋白质表达的有力工具,通过SDS-PAGE电泳分离蛋白质,再转移至膜上,并利用特异性抗体进行检测。然而,实验过程中样本变黄的现象时有发生,这不仅影响凝胶的外观,更可能暗示着实验条件或操作上的问题。本文将深入探讨样本变黄的原因,并提出相应的解决方案。 一、样本变黄的初步观测 在进行Western Blot电泳时,若样本在电泳1小时后呈现黄色,这可能由多种因素导致。变黄的样本不仅影响美观,更可能反映了实验0核酸分离与提纯是分子生物学、生物医学探究及临床检测等范畴中必不可少的基础实验环节。其旨在从样本(例如血液、组织、细胞、病毒等)中分离并提纯出高纯度的DNA或RNA,以便开展后续的PCR扩增、基因测序、分子杂交、芯片检测等多种实验。 实验操作原理 01 裂解过程: 样本首先通过物理和化学手段进行裂解,物理手段可能包含研磨、超声波破碎等,使细胞壁破裂,释放出细胞内的核酸。 化学试剂如十二烷基硫酸钠、苯酚/氯仿、异戊醇等用于0在Western Blotting实验中,将目标蛋白高效地从凝胶转移至印迹膜上,是实验成功的关键一环。这一过程需要根据样品特性和目标蛋白的性质进行细致优化。以下是我们精心总结的六大策略,旨在帮助你提高WB转印效率。 1. 精选转印方式 首先,需根据实验需求选择最适合的转印方式。湿转,适用于广泛分子量范围的蛋白转印,膜与胶完全浸没在转印缓冲液中。半干转,则更适用于30-120kD范围内的蛋白,且转印速度更快,缓冲液仅覆盖膜与滤纸。而快速半0一、细胞凋亡 正常细胞的磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)仅存在于质膜双层内侧。细胞凋亡初期,膜脂质对称性消失,PS由内侧翻转至外侧,暴露于细胞表面。Annexin V,一种36kDa的钙依赖性磷脂结合蛋白,对PS具有高度亲和力。因此,利用荧光标记的Annexin V可检测早期凋亡细胞表面暴露的PS。 细胞凋亡中后期或坏死时,因细胞膜破裂,Annexin V能进入细胞与质膜PS结合。为区分活细胞、早期凋亡细胞及中晚期凋亡(或坏死)细胞,可联合使用荧光0通常的RT-qPCR过程包含RNA提取、反转录和实时荧光PCR三个环节。当某些研究项目需要对某一生物进行多种处理,以检测特定基因的表达量,从而评估该基因对不同压力条件的抵抗能力;或者在某种病原体感染后,检测宿主多个基因的表达情况,以探索可能的通路和相互作用机制时……对于这类样本量大,但每个样本只需单次检测的实验,我们经常推荐采用一步式RT-qPCR方法,即将反转录和实时荧光PCR合并在一个反应体系中,一次操作即可完成表达量的测0一、急性肺损伤(ALI)概述 1. 定义与病理特征: • 急性肺损伤(ALI)是一种高发病率和死亡率的临床呼吸综合征。 • 主要病理特征为肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,导致弥漫性肺间质及肺泡水肿,进而引发急性低氧性呼吸功能不全。 • 病理生理特征包括肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调。 • 临床表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变,严重时可发展为急性呼吸窘迫综合症(ARDS)。0一、制备好的平板,为何培养时要倒置 1.避免培养基与培养皿脱离 在培养实验中,经过制备好的平板需要进行培养时要倒置的主要原因之一是为了避免培养基与培养皿脱离。当我们刚刚完成平板的倒置并盖上培养皿盖后,培养基尚未完全凝固,因此还存在余温和较高的湿度,导致皿盖上会有一些水珠凝结。如果平板保持正放状态,这些水滴可能会流入培养基内,并有可能导致污染发生。此外,水分过多的培养基可能会使菌种在接种时四处流动,导致00细胞培养是一项精细且技术性很强的工作,涉及到细胞的生长、繁殖、传代以及冻存等多个环节。每个环节都需要精心操作,以确保细胞的健康和实验的准确性。今天小曼将为大家讲述细胞从复苏到传代再到冻存的流程中,一些可能被忽略但非常重要的细节。 1细胞培养基如何选择? 如果购买的细胞是买自ATCC或者其他的细胞库,直接问供应商或者查找相关文献;培养基的种类的话,基本上最常用的有四个--MEM、DMEM、1640、F-12。具体可以参考之前的公众0番红固绿染色是一种常用的植物组织染色技术,通过利用染料分子对细胞内不同成分的亲和性差异,实现对特定结构的选择性着色,从而增强细胞结构的可视化效果。以下是关于番红固绿染色实验操作的一些小细节和注意事项。 一、实验原理 番红固绿染色主要基于染料分子与细胞内特定成分的相互作用。番红能够与植物细胞壁中的木质素、纤维素等多糖发生作用,形成鲜明的颜色对比;而固绿则常用于染色含有浆质的纤维素细胞组织,使细胞结构更00在科研实验中,伙伴们时常需评估细胞增殖的状态,譬如探究某个基因对细胞生长的调控作用,或是验证抗癌药物的有效性。小伙伴们,别再向师兄师姐求救了,这里为你汇总了细胞增殖检测的全方位攻略! 一、Brdu/EdU 标记技术 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),作为胸腺嘧啶的“替身演员”,在DNA合成的“戏剧”中替代主角出场。为了吸引目光,它还披上了特异性抗体的“华丽外衣”,在免疫荧光或流式细胞术的“闪光灯”下显露真身,揭示其参与DNA合0在流式细胞术中,设置合理的对照组是确保实验成功的关键。流式细胞术中的对照类型丰富多样,至少包括六种:空白对照、同型对照、单染/单阳对照、荧光减一对照、死活对照和生物学对照。这些对照的主要目的是规避实验中的假阳性或假阴性结果,从而获取高质量的实验数据。 一、空白对照(Blank Control) 空白对照用于界定阴性细胞群、评估细胞大小及颗粒度。通过空白对照,我们可以有效区分细胞的背景荧光与本底自发荧光,同时排除实验处0在qPCR实验的流程中,从样本的收集直至最终结果的解读,涉及多个精细步骤:样本的获取、保存、预处理、检测以及数据的深度分析。在这一系列环节中,对照的应用显得尤为重要,它是确保实验准确性的关键。对照主要分为两大类:阴性对照与阳性对照。 阴性对照的作用 在实验过程中,我们时常面临一个挑战:如何准确区分反应孔中的扩增信号是来自样本的真实扩增,还是由于污染所导致的非特异性扩增?阴性对照的存在正是为了解决这一问题。0在病理质量控制过程中,质控中心的一项关键评估依据是凭借切片的着色状况,来推测样本的固定状况。 为何病理学部门通常选用甲醛来固定常规病理样本呢? 在病理学领域,对病理样本进行固定是处理流程的首要环节,其目标在于借助化学与物理手段,保留组织细胞的生理、病理形态构造,以及生物化学与免疫学组成成分。甲醛固定液凭借其独到的优点,成为了常规病理样本固定的首选方案。 01固定剂的功能 固定剂的核心作用是稳固生物组织中的00000000在实验研究中,对小鼠进行药物注射是常见的操作,包括腹腔、静脉、肌肉、皮下以及皮内等多种注射方式。不同的注射部位,其最大药物注入量以及所使用的针头规格均有所差异。 1. 腹腔注射(Intraperitoneal Injections,简称IP) • 操作要点:小鼠腹腔注射通常选择下腹部腹中线两侧约0.5cm的位置。为避免损伤内脏,注射时需使小鼠头部略向后仰,促使下腹部脏器上移。注射前需用75%酒精消毒注射区域,然后以45度角刺入腹腔,确认针尖穿透腹膜后(此0荧光素酶报告基因(Luc)系统,依托荧光素为底物,巧妙检测萤火虫荧光素酶活性。此酶能催化荧光素氧化为oxyluciferin,过程中释放生物荧光,成为研究热点。 荧光素酶家族庞大,能催化多样底物发光,而哺乳细胞却无此内源酶。其中,细菌荧光素酶因热敏性在哺乳细胞研究中受限;萤火虫荧光素酶则凭借高灵敏度、宽检测范围(7-8个数量级),成为哺乳细胞研究的首选,尤其适合高通量筛选。更值得一提的是,新型萤火虫荧光素酶无需细胞裂解即